2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
本產(chǎn)品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。該酶所具有的chao強(qiáng)3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同時具有合成速度快的特點(diǎn)，2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
2× KOD PCR Master Mix (含染料)
2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
目錄號:71517
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 71517-05 | 71517-0100 |
2× KOD PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 2 年。經(jīng)常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個月。
產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。該酶所具有的chao強(qiáng)3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同時具有合成速度快的特點(diǎn)，聚合速度約為普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNAPolymerase的2倍，達(dá)到100-138bp/秒，可以在短時間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的擴(kuò)增產(chǎn)物，特別適合于高保真地擴(kuò)增6kb以內(nèi)的PCR 產(chǎn)物，擴(kuò)增所得的DNA為平末端，可用于基因克隆、表達(dá)及突變分析等分子生物學(xué)實(shí)驗。
KOD擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物為平末端（Blunt），可直接用于Blunt載體克隆
本產(chǎn)品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切、連接、測序等后續(xù)操作。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 高產(chǎn)：產(chǎn)量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 100-138bp/sec！
3. 高成功率：對于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板有良好效果！
2 × KOD PCR Master Mix 使用說明：
一、配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 終濃度 |
2× KOD PCR Master Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | <0.2 μg | <0.5 μg | as required |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μl |
參考模板用量：（以 50 μl 反應(yīng)體系為例）
質(zhì)粒：0.1-10 ng；
細(xì)菌基因組：10-100 ng；
人類基因組：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：用 ddH2O 補(bǔ)足反應(yīng)體系（體積）至 50 μl。實(shí)際操作中，首先要計算好需要補(bǔ)加 ddH2O 的量以后，建議先加水，然后按上述順序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混勻后，離心數(shù)秒使反應(yīng)混合物沉到管底，然后將反應(yīng)管置于 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增。
二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件：（請根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initialdenaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 20-30 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 20-30 seconds | |
Extension | 72℃ | 1-4kb / minute | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意：一般情況下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
如果擴(kuò)增片段小于 4 kb，建議 KOD 酶的延伸速度為 1kb / 15 sec；
如果擴(kuò)增片段大于 4 kb，建議延伸速度為 1kb / 20-30 sec。
三、結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。
2× KOD PCR Master Mix(含染料) PCR相關(guān)
