超純土壤基因組DNA快速提取試劑he
普通的手提或者試劑盒提取的土壤基因組DNA由于常常殘留有PCR的強(qiáng)烈抑制物如腐殖酸、棕黃酸等雜質(zhì)造成實(shí)驗(yàn)失敗，此外，由于采用了劇烈的玻璃珠擊打來(lái)破裂菌體，常常造成DNA剪切和降解。超純土壤基因組DNA快速提取試劑he
超純土壤基因組DNA快速提取試劑盒
超純土壤基因組DNA快速提取試劑he
目錄號(hào)：40217
目錄編號(hào) | 包裝單位 |
40217-50 | 50次 |
v 適用范圍：
適用于快速提取各種土壤基因組DNA
v 試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：
試劑盒組成 | 保存 | 50次 |
溶液SUS | 室溫 | 25 ml |
溶液LYS | 室溫 | 6 ml |
溶液S1 | 室溫 | 15 ml |
溶液S2 | 室溫 | 15 ml |
溶液S3 | 室溫 | 30 ml第一次使用前，請(qǐng)加2倍體積無(wú)水乙醇 |
抑制物去除液IR | 室溫 | 25 ml |
漂洗液WB | 室溫 | 15ml第一次使用前，請(qǐng)加60ml無(wú)水乙醇 |
洗脫緩沖液EB | 室溫 | 10 ml |
蛋白酶K fen （可選）20mg/ml | 室溫 | 20mg |
吸附柱AC和收集管 | 室溫 | 50套 |
本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。
儲(chǔ)存事項(xiàng):
1. 溶液LYS或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,注意不要?jiǎng)×覔u晃，以免產(chǎn)生大量氣泡。
2. 為避免降低活性，方便運(yùn)輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1毫升滅菌水溶解，因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃保存。
3. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
v 產(chǎn)品介紹：
普通的手提或者試劑盒提取的土壤基因組DNA由于常常殘留有PCR的強(qiáng)烈抑制物如腐殖酸、棕黃酸等雜質(zhì)造成實(shí)驗(yàn)失敗，此外，由于采用了劇烈的玻璃珠擊打來(lái)破裂菌體，常常造成DNA剪切和降解。本公司經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期研發(fā)開(kāi)發(fā)出了具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的土壤基因組DNA，通過(guò)zhuan利配方的腐殖酸和棕黃酸去除試劑配合特殊處理的純化柱，可以zui大程度的去除這些雜質(zhì)，同時(shí)加上多次柱漂洗，確保得到的DNA具有ji gao純度，此外du特的抽提和裂解體系可以迅速裂解細(xì)胞（壁）和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性。
v 產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 本公司du有的zhuan利配方和純化柱能有效去除腐殖酸等雜質(zhì)。
2. 不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性，長(zhǎng)度可達(dá)30kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。
3. 兼容性強(qiáng)，適用于各種不同的土壤包括淤泥等提取困難的土壤。
4. 多步驟去除各種雜質(zhì)和抑制物，保證了ji高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9。
5. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
6. 快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在60分鐘內(nèi)完成。
v 注意事項(xiàng)：
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類(lèi)似離心機(jī)。
2. 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前根據(jù)需要將水浴預(yù)熱到37℃或者70℃?zhèn)溆谩?/span>
3. 溶液S3和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5， pH過(guò)低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
v 操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB和溶液S3中加入指ding量無(wú)水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
1. 取0.2克土壤放入離心管，用牙簽或者槍頭搗碎后加入0.5ml溶液SUS，用槍頭攪拌后短暫渦旋幫助重懸。
如果預(yù)計(jì)土壤里面含有較多難裂解的菌類(lèi)如革蘭氏陽(yáng)性菌，可先在0.5ml溶液SUS里面加入10mg的溶菌mei，吹打混勻后再加入，并加做步驟2。
2. （可選步驟）:37℃溫育30分鐘，每10分鐘顛倒混勻幾次。
對(duì)于難裂解的菌類(lèi)如革蘭氏陽(yáng)性菌含量豐富的土壤，并在上一步驟加入了溶菌mei的樣品，需要加做此步驟來(lái)幫助裂解。
3. 加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，短暫渦旋幫助混勻。
可選做步驟: 為提高產(chǎn)量，可以在37℃振蕩10分鐘或者渦旋振蕩2分鐘。（注意渦旋振蕩可能剪切DNA）
4. 加入120μl 溶液LYS，短暫渦旋混勻，65℃溫育30分鐘，期間顛倒混勻幾次。
65℃溫育時(shí)間可以根據(jù)具體樣品種類(lèi)和產(chǎn)量進(jìn)行延長(zhǎng)或者縮短以取得優(yōu)良產(chǎn)量和純度，可在10分鐘－2小時(shí)范圍內(nèi)調(diào)整。
5. （可選步驟）:于－70℃冷凍，65℃融化，反復(fù)3次。
對(duì)于難裂解的菌類(lèi)如革蘭氏陽(yáng)性菌含量豐富的土壤， 可加做此步驟來(lái)幫助裂解。
6. 顛倒混勻后，13,000 rpm離心2分鐘,小心轉(zhuǎn)移上清至新的離心管（記錄上清體積）。
7. 加入1/3(三分之一)體積的溶液S1,顛倒幾次，渦旋5秒混勻后，冰上放置5分鐘。
8. 13,000 rpm離心5分鐘,小心轉(zhuǎn)移上清至新的離心管（記錄上清體積）。
9. 加入1/3(三分之一)體積的溶液S2,顛倒幾次，短暫渦旋混勻后，冰上放置5分鐘。
該步驟主要是進(jìn)一步去除humic substance等PCR抑制物質(zhì)以提高純度，但是會(huì)降低一些產(chǎn)量，如果對(duì)產(chǎn)量要求高或者提取的DNA不用于PCR，可以嘗試略去此步驟以提高產(chǎn)量。如果預(yù)計(jì)土壤成份復(fù)雜PCR抑制物質(zhì)多，可以適當(dāng)提高S2加入量(如加入等體積的S2)，可以提高純度，但是注意也會(huì)顯著降低產(chǎn)量。
10. 13,000 rpm離心5分鐘,小心轉(zhuǎn)移上清至新的離心管（記錄上清體積）。
11. 加入1.5倍體積的溶液S3（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!）,顛倒幾次，短暫渦旋混勻。
12. 將上一步混合物700μl（包括可能有的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），12,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。重復(fù)直到所有的混合物都加完。
13. 加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm 離心30秒，棄廢液。
14. 加入700μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
15. 加入500μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
16. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
17. 取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）， 室溫放置3-5分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于50μl，體積過(guò)小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。
18. DNA可以存放在2-8℃,如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。
超純土壤基因組DNA快速提取試劑he
