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產品展示
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全血(液體樣本)microRNA快速提取試劑盒

  • 型   號:91214
  • 價   格:
  • 更新時間:2025-04-18
  • 廠家性質:經銷商

常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA,Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA(生物通上有專題文章闡述)。
全血(液體樣本)microRNA快速提取試劑盒

Blood miRNA Mini Kit

全血(液體樣本)microRNA 快速提取試劑盒


全血(液體樣本)microRNA快速提取試劑盒 

目錄號:91214

產品內容

產品成份

91214-50(50 次)

裂解液 RLS

50 ml

Wash Solution 1

12 ml(需加入指ding量無水乙醇)

Wash Solution 2/3

10 ml(需加入指ding量無水乙醇)

70%乙醇

9 ml(需加入指ding量無水乙醇)

RNase-Free ddH2O

5 ml

RNA 吸附柱和收集管

50 套

microRNA 吸附柱和收集管

50 套

RNase-Free 1.5ml 離心管

50 支

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫(15 ~ 25℃)

產品簡介

常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA,Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA(生物通上有專題文章闡述)。

裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮型的 Trizol ),配合 miRNA 專用的溶液體系,專用于快速提取全血、血漿、血清、腦脊液、尿液等液體樣本的 miRNA 和其它各種小 RNA(15-30 nt )。

Blood miRNA Mini Kit 可以提出來包含 miRNA 的總 RNA,用于miRNA 的 RT、qPCR 檢測,以及全轉錄組測序等;根據需要,也可以一次性把 miRNA和總RNA(mRNA、tRNA、rRNA)分別提出來。

產品特點

1. 本公司生產的Blood miRNA mini Kit質量優(yōu)異,可以媲美進口品牌。

2. 本品可在常溫下提取 RNA,不需要 4℃離心機;亦可以兼容 4℃離心機。

注意事項

1. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用幾天后,可能會出現(xiàn)沉淀晶體,并不影響使用,取其上清直接使用就可以。

2. 血液 RNA 的常溫保存/運輸/提取的簡易方案:

臨床取樣:在臨床上,使用抗凝管采血后,取250μl新鮮血液,加入 750μl 的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent,Cat#91012-100),用移液槍反復抽打并振蕩混勻,在室溫裂解 5~10 min,直至血細胞充分發(fā)生裂解。

保存:經裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 個月,在-70℃保存半年。

運輸:可冰袋 4℃運輸 1 天,干冰-20℃運輸一周。

提取:后續(xù)RNA提取按 R213(或 R012)的說明書進行。

3. RNA 純度及濃度檢測:

血清/血漿的 RNA 含量特別低,已經低于分光光度計測量的下限,無法準確測量,因此無法通過測量 OD 值或者比值的方法來判斷濃度或者純度,只能通過下游做 RT-qPCR 來判斷產量。同時無細胞的血清/血漿中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA,因此跑電泳檢測 RNA 完整性并不適用于血清/血漿 RNA。


具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準


操作步驟

第一次使用前,先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙醇中加入無水乙醇,加入量詳見瓶上的標簽。

1. 每 250 μl 液體樣品 (血清、血漿、腦脊液等),加入 750 μl 裂解液 RLS,用移液器反復抽打幾次,然后劇烈震蕩 15 sec,充分混勻。(液體樣品和裂解液 RLS 的終體積比總是 1:3)

注意:對于含有高污染物樣品(如全血樣品),可以用滅菌水按照 1:1的比例稀釋一倍后開始提取。

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min,使得核酸蛋白復合物wan全分離。

3. 加入 200 μl 氯仿,劇烈振蕩 15 秒,并在室溫下放置 2 分鐘。

4. 于 4℃(或室溫)13,000 rpm 離心 10 分鐘。 樣品會分成三層:下層有機相、中間層、上層無色的水相,RNA 存在于水相中。水相層的容量大約為所加裂解液 RLS 體積的 70%。

5. 轉移上清(約 500 μl)至一個新的離心管中,加入 1.5 倍體積(750 μl)的無水乙醇,吹打混勻。

6. 每次轉移≤750 μl上清混合液至RNA吸附柱中,12,000 rpm離心1 min,倒棄濾液。重復此過程,直到上清混合液全部上柱。

7. 向 RNA 吸附柱內加入 700 μl Wash Solution 1(檢查是否已加入乙醇),12,000 rpm 離心 1 min,倒棄濾液。

8. 向 RNA吸附柱內加入 500 μl Wash Solution 2/3(檢查是否已加入乙醇),12,000 rpm離心1 min,棄濾液。

9. 重復步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中,12,000 rpm 離心 2min,除去膜上殘留的乙醇。

11. 取出 RNA 吸附柱,放入一個新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中,向吸附膜的中央部位懸空滴加 30~50 μl RNase-Free ddH2O,室溫放置 1 min,12,000 rpm 離心 1 min,管底即包含 microRNA 的總 RNA。

附:microRNA 富集方法(僅僅提取 microRNA,不包含>200 nt 其它總RNA 成份。一般不推薦)

注意:當非特異擴增較多或者擴增背景較高時,可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA。

1. 按照前面標準操作步驟 1-4 操作,直到得到上清。

2. 取上清(約 500 μl)至一個新的離心管,加入等體積 70%乙醇(必須是室溫的),吹打混勻,不要離心。

3. 取700 μl上清混合液,加入一個RNA吸附柱中,12,000 rpm離心1 min,收集濾液。并將濾液轉移至一個新的離心管,然后把 RNA 吸附柱放回空的收集管內,再加入剩下的混合物,離心,收集濾液。

此時,濾液含有 microRNA, RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總RNA(mRNA、tRNA、rRNA 等大于 200nt 的 RNA),如果有需要,可以按照前面標準操作步驟 7-11 操作,漂洗、洗脫,得到去除了 microRNA 的總 RNA。

4. 較精確估計濾液體積,加入 0.65 倍體積無水乙醇(必須是室溫的),吹打混勻,不要離心。

5. 將≤750 μl濾液混合物加入microRNA吸附柱中,12,000 rpm離心1min,micoRNA 被吸附在膜上,倒棄廢液。重復此過程,直到所有溶液都上柱。

6. 按照前面標準操作步驟 7-11 操作,經漂洗,洗脫后,得到富集的microRNA。

相關產品:

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit(加尾法)

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit(for qPCR,加尾法)

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit(P418-25 + P419-500)

 全血(液體樣本)microRNA快速提取試劑盒 


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