NobleRyder 支原體檢測(cè)試劑盒 即用型
NobleRyder 支原體檢測(cè)試劑盒 即用型NobleRyder 支原體檢測(cè)試劑盒 即用型試劑盒 VS0979
NobleRyder 支原體檢測(cè)試劑盒 即用型
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域，因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周?chē)煽吹皆S多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA染色斑，說(shuō)明有支原體污染。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。
操作步驟：
貼壁細(xì)胞：
1.被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時(shí)，接種正常無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。
2.5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min，
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周?chē)欠裼兴{(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
懸浮細(xì)胞：
1.收集需檢測(cè)的細(xì)胞，1500rpm，5min。
2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，用無(wú)菌水洗滌玻片3次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周?chē)欠裼兴{(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
結(jié)果判斷（參考）：
陰性：僅見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽(yáng)性：除細(xì)胞外，細(xì)胞周?chē)梢?jiàn)大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項(xiàng)：
1.Hoechst工作液對(duì)人體有害，請(qǐng)注意防護(hù)。
2.固定液有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行固定。
3.支原體檢測(cè)時(shí)，最好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2～3代，這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4.本試劑盒用于6孔板檢測(cè)時(shí)，可以進(jìn)行50次檢測(cè)反應(yīng)。
5.檢測(cè)支原體污染，可以使用支原體高效Vero細(xì)胞，這樣可以提高檢測(cè)靈敏度，即將被檢測(cè)樣品接種于Vero細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。
NobleRyder 支原體檢測(cè)試劑盒 即用型
