BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明

本試劑盒自訂購之日起一年內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時可做500孔。當(dāng)使用2ml比色皿時可做50孔，如果是1ml比色皿時可做100孔。

產(chǎn)品簡介

堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結(jié)果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實(shí)驗中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

使用說明

一，微孔酶標(biāo)儀法

1.         配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.         稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加PBS補(bǔ)足到20微升。

3.         將樣品作適當(dāng)稀釋（多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。

4.         各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分鐘。用酶標(biāo)儀測定A562nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。

 二，分光光度計法

如沒有酶標(biāo)儀，可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下：

1．配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2，  稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取100微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至1ml（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。

3，  取八支（或者更多）5ml離心管，標(biāo)讓號，按下表加入試劑。

4，  37℃放置15-30分鐘。用分光光度計測562nm處吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度。